iGENEA Аналитический метод

Аналитический метод

Берется мазок слизистой оболочки полости рта; мазок помещают в буферный раствор для предотвращения порчи образца.

После прибытия и регистрации образцов в FamilyTreeDNA в Хьюстоне (США) образцы и любая важная дополнительная информация передаются в лабораторию (Центр исследований геномики) для обработки.

Для извлечения ДНК из образца тампона добавляется фермент (протеиназа К), который разрушает клетки и высвобождает ДНК в растворе. С судебно-экспертными образцами, такими как лизанные штампы или зубы, обращаются очень похожим образом. Кусок штампа добавляется в раствор буферной протеиназы. Все образцы инкубируются в течение ночи (нагреваются до 56 ºC) и взбалтываются, чтобы облегчить разрушение клеток.

Штрих-код новой пластины для хранения ДНК сканируется и помещается в дозатор. Сканируются также образцы, взятые у отдельных клиентов. Робот всегда перемещает 8 образцов одновременно в планшет, вмещающий до 96 образцов для извлечения. Эта пластина уже содержит раствор, содержащий крошечные магнитные бусинки. Магнитный раствор ДНК хорошо перемешивается, поэтому отрицательно заряженная ДНК притягивается положительно заряженными магнитными бусинами.

Пластина помещается на магнитную подставку, и буферный раствор бережно удаляется. Промойте магнитные шарики ДНК и пипеткой "буфер хранения ДНК" в каждую из 96 лунок. Пластина размещается на нагревательном блоке и нагревается до 65ºC. ДНК отделяется от магнитных бусин и передается в буфер хранения.

Пластина с 96 отдельными емкостями для хранения (одиночные трубки с синими крышками) открыта. Буфер, который теперь содержит ДНК, передается в отдельные пробирки для хранения. Трубки снова закрыты.

Сканируется весь диск. Каждая трубка имеет свой штрих-код на нижней стороне. Каждому номеру образца четко присваивается штрих-код и хранится в базе данных REMP. Пластина с образцами ДНК хранится при температуре -20 ºC в системе замораживания.

Пробы, подлежащие анализу, "заказываются" из базы данных REMP. Отдельные трубки из панелей хранения пробиваются в "доставочную пластину". Штрих-коды отдельных трубок снова сканируются для контроля, а подготовленная смесь химикатов и красителей для анализа ДНК (смесь грунтовок) подается роботом для пипетирования на пластину ПЦР 96. Очень мало размороженного раствора ДНК пипетировано в смесь ПЦР, и пластина запечатывается фольгой. Пластина помещается в устройство ПЦР и запускается программа для дублирования и "окрашивания" ДНК. ДНК копируется при выполнении этапов нагрева и охлаждения. Примерно через 3 часа ПЦР будет завершена, и устройства ПЦР будут готовы к секвенированию или электрофорезу.

Продукты ПЦР для анализа митохондриальной ДНК (мтДНК), например, должны быть очищены еще раз перед началом электрофореза, который выполняется роботом. Затем продукты ПЦР переносятся на 16 несущих пластин, каждая из которых содержит 96 образцов для секвенсора, и помещаются в устройство электрофореза.

В приборе каждый образец ДНК "мигрирует" через капилляр, заполненный гелем (полимером), на который подается положительное напряжение (электрод). Маленькие молекулы могут мигрировать сквозь гель быстрее, чем большие молекулы. ДНК сортируется по "размеру" и регистрируется камерой с помощью цветового маркера.

Последовательность красных, синих, зеленых и черных пиков дает (индивидуальную) последовательность мтДНК.

Вторая возможность - регистрация одиночных пиков (коротких тандемных повторов STR), например, при анализе Y-хромосомного гаплотипа человека.

Данные анализа анализируются программным обеспечением и снова проверяются ученым. В случае сомнений или особенно необычных результатов, международная группа ученых, работающих в FamilyTreeDNA, состоящая из биологов и биотехнологов, которые работают с ДНК-анализом и генетикой более 15 лет, консультируется с исследователями.

Так работает анализ происхождения ДНК

Анализа слюны достаточно, чтобы получить образец Вашей ДНК. Взятие анализа проходит просто и безболезненно, это можно сделать дома. К набору для взятия анализа прилагается контейнер, в котором его можно отправить по почте.