iGENEA Método de análise

Método de análise

É retirada uma zaragatoa da mucosa oral; a zaragatoa é colocada numa solução tampão para evitar a deterioração da amostra.

Após a chegada e registo das amostras no FamilyTreeDNA em Houston (EUA), as amostras e qualquer informação adicional importante são entregues ao laboratório (Genomics Research Center) para processamento.

Para extrair o ADN da amostra de zaragatoa, adiciona-se uma enzima (Proteinase K) a cada amostra para rebentar as células e libertar o ADN na solução. Amostras forenses, como carimbos lambidos ou dentes, são tratadas de forma muito semelhante. Um pedaço do selo é adicionado a uma solução tampão proteinase. Todas as amostras são incubadas durante a noite (aquecidas a 56 ºC) e agitadas para facilitar a dissolução das células.

O código de barras de uma nova placa de armazenamento para o ADN é lido e colocado no robot de pipetagem. As amostras individuais de clientes também são digitalizadas. O robô sempre transfere 8 amostras simultaneamente para um prato para até 96 amostras para extração. Esta placa já contém uma solução contendo pequenas esferas magnéticas. A solução magnética do ADN é bem misturada de modo a que o ADN que é carregado negativamente seja atraído pelos grânulos magnéticos positivamente carregados.

A placa é colocada num suporte magnético e a solução tampão é cuidadosamente removida. Lavar os grânulos magnéticos com o ADN e pipetar um "tampão de armazenamento de ADN" em cada um dos 96 poços. A placa é colocada sobre um bloco de aquecimento e aquecida a 65ºC. O ADN separa-se dos grânulos magnéticos e passa para o buffer de armazenamento.

Abre-se a placa de armazenamento com 96 recipientes de armazenamento separados (tubos simples com tampa azul). O tampão, que agora contém o ADN, é transferido para os tubos individuais para armazenamento. Os tubos estão fechados novamente.

Todo o disco é escaneado. Cada tubo individual tem seu próprio código de barras na parte inferior. Cada número de amostra é claramente atribuído a um código de barras e armazenado no banco de dados REMP. A placa com as amostras de ADN é armazenada a -20 ºC no sistema de congelação.

As amostras a analisar são "encomendadas" na base de dados REMP. Os tubos individuais das placas de armazenamento são perfurados numa "placa de entrega". Os códigos de barras dos tubos individuais são novamente lidos para controlo e uma mistura preparada de produtos químicos e corantes para análise de ADN (mistura de iniciadores) é apresentada numa placa de 96 PCR pelo robot de pipetagem. Muito pouca solução de ADN descongelada é pipetada para a mistura de PCR e a placa é selada com uma folha. A placa é colocada em um dispositivo PCR e o programa de duplicação e "coloração" do DNA é iniciado. O DNA é "copiado" em etapas de aquecimento e resfriamento. Após cerca de 3 horas, a PCR é concluída e os produtos PCR estão prontos para sequenciação ou electroforese.

Os produtos PCR para a análise do ADN mitocondrial (mtDNA), por exemplo, têm de ser novamente purificados antes da electroforese, que é feita por um robô. Os produtos da PCR são então transferidos para um máximo de 16 placas portadoras com 96 amostras cada uma para o sequenciador e colocados no dispositivo de electroforese.

No dispositivo, cada amostra de ADN "migra" através de um capilar cheio de gel (polímero) ao qual é aplicada uma tensão positiva (eléctrodo). As moléculas pequenas podem migrar através do gel mais rapidamente do que as moléculas maiores. O DNA é classificado por "tamanho" e registrado por uma câmera usando o marcador de cor.

A sequência de picos vermelho, azul, verde e preto produz a sequência mtDNA (específica da pessoa).

A segunda possibilidade é o registo de picos únicos (Short Tandem Repeats STR), por exemplo, na análise do haplótipo cromossómico Y de um homem.

Os dados de análise são avaliados por software e verificados novamente por um cientista. Em caso de dúvida ou de resultados particularmente invulgares, o grupo internacional de cientistas que trabalham na FamilyTreeDNA, composto por biólogos e biotecnólogos que trabalham há mais de 15 anos com a análise do ADN e a genética, consulta os investigadores.

É assim que funciona a análise da origem do DNA

Uma amostra de saliva é suficiente para adquirir o seu DNA. A amostragem é simples e indolor e pode ser feito emcasa. Com o envelope incluído no pacote de amostragem o(a) senhor(a) pode-nos enviar a amostra.