iGENEA Método de análisis

Método de análisis

Se retira una muestra de hisopado bucal; el hisopo se coloca en una solución reguladora para que la muestra no se eche a perder.

Luego del arribo y registro de las muestras en FamilyTreeDNA en Houston, las muestras y eventualmente la información adicional son entregadas al laboratorio (Genomics Research Center) para su procesamiento.

Para poder extraer el ADN de las muestras del hisopado, se agrega a cáda muestra una enzima (proteinasa K), para desintegrar las células y que el ADN quede libre en la solución. Este procedimiento es similar al aplicado a muestras forenses como estampillas con saliva o dientes: se introduce un pedazo de la estampilla en una solución reguladora con proteinasa. Todas las muestras se incuban durante la noche (a una temperatura de 56º), y son también agitadas, para que las células se desintegren con mayor facilidad.

El código de barras de una nueva placa de apoyo para el ADN es escaneado y colocado en el robot pipeteador. Las muestras individuales de los clientes también son escaneadas. El robot siempre transfiere 8 muestras simultáneamente a una placa con capacidad para hasta 96 muestras para la extracción del ADN. Esta placa ya contiene una solución en la que hay minúsculas bolillas imantadas . La solución de ADN e imanes se mezcla bien, para que el ADN, que tiene carga negativa, sea atraído por las bolillas imantadas de carga positiva.

La placa se coloca en un estante magnético y la solución reguladora se retira cuidadosamente. Las bolillas imantadas con el ADN son lavadas y finalmente se pipetea una “placa reguladora de ADN” en cada una de las 96 hendiduras. La placa se coloca en un bloque calefactor y se calienta a 65º. El ADN se separa de las bolillas imantadas y pasa a la solución reguladora.

Se abre la placa de apoyo con 96 contenedores separados (tubos individuales con tapas azules). El regulador que ahora contiene el ADN es transvasado a los tubos individuales para su almacenamiento. Los tubos son nuevamente cerrados.

Toda la placa es escaneada. Cada tubo individual tiene un código de barras propio en el lado inferior. Cada número de muestra se corresponde inequívocamente con un código de barras y es guardado en el banco de datos REMP. La placa con las muestras de ADN se almacena en el sistema de refrigeración a -20 ºC.

Las muestras a ser analizadas se “ordenan” al banco de datos de REMP. Los tubos individuales de las placas de apoyo son estampados en una “placa de entrega”. Los códigos de barras de los tubos individuales son sometidos a un nuevo escaneado de control y una mezcla de químicos y colorantes para el análisis del ADN (primermix) es colocada en una placa PCT de 96 contenedores por el robot pipeteador. Se pipetea muy poco de la solución de ADN descongelada en la mezcla PCR, y la placa es sellada con un folio. La placa se coloca en un aparato de PCR y se inicia el programa para la replicación y “coloración” del ADN. Durante los pasos de calentamiento y refrigeración, el ADN es “copiado”. Luego de aproximadamente 3 horas, el PCR se separa y los productos del PCR están listos para la secuenciación, e.d. para la electroforesis.

Los productos PCR para analizar por ej. el ADN mitocondrial (ADNmt) deben ser nuevamente purificados antes de la electroforesis, tarea que realiza un robot. Simultáneamente, los productos PCR son transferidos hasta en 16 placas de apoyo con 96 muestras cada una para el secuenciador, y se colocan en el aparato de electroforesis.

En el aparato, cáda muestra de ADN “transita” un capilar relleno con gel (polímero), por donde circula una corriente positiva (electrodos). Las moléculas pequeñas pueden transitar el gel más rápidamente que las más grandes. De este modo, el ADN se organiza “por tamaño”, y se registra con una cámara por medio de la identificación con colorantes.

La sucesión de peaks rojos, azules y negros arroja la secuencia de ADNmt (específica para una persona).

Una segunda posibilidad es el registro de peaks aislados (Short Tandem Repeats) STR), por ej. en el análisis del haplotipo cromosómico de un varón.

Los datos del análisis son evaluados con apoyo de un software específico y vueltos a controlar por un científico. En unos pocos casos dudosos o ante resultados particularmente inusuales, se consulta al equipo internacional de científicos de FamilyTreeDNA, que consiste de biólogos y biotecnólogos que llevan 15 años dedicándose al análisis del ADN y la genética.

Así es como funciona el análisis del origen del ADN

Una muestra de saliva basta para obtener su ADN. La extracción de la muestra es sencillo e indoloro, y puede realizarse en casa. Envíe las muestras en el sobre adjunto al set para la toma de muestras.